**CAT#:15-18620** 采用低温运输，储存于-20℃。以下是尊龙凯时婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（Leishmania infantum Probe qPCR Kit）的使用手册V11。

产品介绍及特点

该试剂盒专为婴儿利什曼虫的检测而设计。婴儿利什曼虫（Leishmania infantum）可能引起动物源性内脏利什曼病（黑热病）。研究表明，婴儿利什曼虫可以在感染人类或犬类后保持无症状状态，而无症状感染的犬只在疾病传播中具有重要作用。

本产品基于探针法荧光定量PCR原理开发，具有以下特点：

• 即开即用，用户仅需提供DNA模板。
• 提供阳性对照，便于识别假阴性样本。
• 反应快速，灵敏度高。
• 本试剂盒可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，仅限科研使用。

规格及成分

以下是试剂盒所含组件及其规格：

• 2×Probe qPCR Mix: 600μL (编号: 190504a)
• DEPC-H2O: 1 mL (编号: 180701)
• 婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液: 90μL (编号: 15-18620yp)
• 阳性对照: 50μL (浓度: 1×10E8拷贝/μL, 编号: 18620pc)
• 使用手册: 1份 (编号: 15-18620sc)

运输及保存

需低温运输，存放于-20℃，有效期为一年。阳性对照须单独存放，避免污染其他试剂。用户需自备样品DNA和超纯水。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

使用任意自选方法提取和纯化样品DNA。本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，以下稀释操作需在独立区域进行，以避免污染。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰备用。
4. 用新枪头在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰备用。
5. 重复上述操作，最终得到6个不同稀释度的标准曲线样品，放冰备用。如不需制作标准曲线，直接将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

若待检样品数量为N，准备N+2个qPCR管（包括阴性对照和阳性对照），向各PCR管中加入以下成分：

四、添加模板（模板添加区）

在qPCR管中依次加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后，立即开始扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪的样品槽，执行以下扩增程序：

六、结果分析

如果制作了标准曲线，使用阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。根据待测样品的Ct值推算其DNA浓度的log值。

如果未制作标准曲线，则依据以下标准判定结果：

• 阳性对照：Ct值<30，出现明显指数增长，呈现典型的S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。
• 样本检测结果：
  • Ct值<35，呈明显指数增长，说明样本中存在婴儿利什曼虫，结果为阳性；
  • Ct值38或无Ct值，说明样本中未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；
  • Ct值在35-38之间的样本，应进行复检，并依据复检结果判定阳性或阴性。

相关产品

推薦使用尊龙凯时婴儿利什曼虫染料法荧光定量PCR试剂盒。